荧光滤光片噪声终止器

2022-11-04 14:54:44 浏览:246

前言

尼康创新的新型荧光滤光片块设计有助于消除显微镜荧光光路中出现残留杂散光的可能性,从而大大提高发射信噪比。该技术被称为噪声终结器,可将偏离的杂散光从物镜光收集路径中引导开来,从而显着改善图像对比度。本交互式教程演示了噪声终结器技术的工作原理。

 

 

 

教程说明

本教程初始化了一个传统的荧光滤光片光学模块(来自倒置显微镜),其中包含一个激发和屏障滤光片,以及一个二色镜,出现在窗口中。来自光源的光子(黄色球体)从窗口右侧进入滤光片块并通过激发滤光片,激发滤光片是一种带通滤光片,主要允许510至560纳米(绿光)之间的波长通过。离开激发滤光片(绿色球体)的光被二色镜以90度角偏转,直至物镜和标本。一些能够通过激发滤光片的较短和较长的波长(在教程中表示为红色和蓝色球体)不会被二色镜偏转并穿过。这些光子的一部分是荧光显微镜中的主要噪声源,它们从光学块的内部反射,并且能够以倾斜的角度穿过屏障滤光片,最终到达检测器。

为了操作本教程,请使用“照明强度”滑块来调节进入滤光片光学模块的光子数。可以启用“激活噪点终结器”复选框(默认禁用)来演示尼康偏转器技术,该技术可有效捕获原本会产生噪声的光子。当噪声终结器复选框被激活时,光子通过光块的后部流入终结器管并被中性密度材料吸收,从而逃离显微镜光路。任何未被中性密度材料吸收的光都会反射到终结器管的末端,最终被分散。显微镜配置单选按钮可用于在倒置(默认)组织培养或传统立式仪器的光学块和噪声终止子方向之间进行选择。使用“教程速度”滑块控制光子流过光块的速率。

任何荧光显微镜的基本特征都是提供一种机制,通过选择性滤波照明激发标本,然后使用第二个滤光片隔离弱得多的荧光发射信号,以便在黑暗背景上以最大灵敏度形成图像。在许多实验中,生物标本中的局部探针浓度非常低,以至于只有一小部分激发光被荧光物质吸收。此外,在那些能够吸收一定量照明的荧光团中,发出二次荧光的百分比甚至更低。由此产生的荧光发射亮度水平将比照明亮度低三到六个数量级。因此,荧光显微镜的基本问题是对标本产生高效照明,同时捕获微弱的荧光发射,有效地与更强烈的照明波段分离。在现代荧光仪器中,这些条件通过组合的滤光片来满足,滤光片根据二色分光镜的作用和特性协调激发和发射要求。

二色分光镜(镜面)在反射光荧光显微镜中功能的原理在可见光谱的绿色区域(550纳米)激发照明和红色(620至660纳米)波长的荧光的教程中概述。高强度光源以高通量密度(通常覆盖大部分紫外和整个可见光谱)输出宽光谱激发波长,该波长穿过照明器并首先遇到选择适当波段进行激发的滤光片(在教程中标记为激发滤光片)。在这种情况下,滤光片以高效率通过波长在510至560纳米之间的光,但也允许其他波长以更小的程度通过。激发光接下来到达二色镜并反射到物镜后孔中,形成一个沐浴样品的照明锥。二色镜以45度角放置在光路中,旨在选择性反射490至565纳米之间的波长(基本上是蓝绿色和绿色波长),同时传输较短和较长的波长。

由于二色镜仅反射窄带宽的光,因此设法通过激发滤光片的短于490纳米且长于565纳米的照明波长也通过二色镜传输。请注意,激发光的反射效率不是100%,因此,少量绿光通过二色镜而不被反射。此外,并非所有波长高于565或低于490纳米的光都通过镜子传输。该光的一小部分被镜子通过物镜反射到标本上。从激发滤光片通过二色镜传输的光部分被滤光片内部的平面黑色涂层吸收,但有些从表面反射并以倾斜角度穿过阻挡滤光片,从而产生荧光背景噪声。

技术专题

作          者: 泮桥成像光电商城

出          处: https://www.ipanqiao.com/article/868

版          权:本文版权归泮桥成像光电商城所有

转          载:欢迎转载,但必须保留上述声明;必须在文章中给出原文链接;否则必究法律责任。

Copyright © 2019-2022 南京超维景生物科技有限公司 版权所有 www.ipanqiao.com苏ICP备20009590号-1
联系我们
立即做合同
微信客服
电话咨询

400-998-9826

17302548620

快速留言

泮桥成像光电商城专业人员会在24小时之内联系您

关闭 提交