简介
相对荧光强度是在计算钙荧光信号时采用的一种常见的归一化手段，表达符号ΔF/F中，分母F是信号本身的基线水平，ΔF则是相对基线水平发生的相对变化量。在计算ΔF/F时往往会考虑到视频背景、z方向污染等影响，因此多数发表的文章都基于ΔF/F进行数据分析，而非是原始亮度本身。
计算步骤
这里以Liang B[1]等人在发表文章中描述的减圆环法为例：
（1）消除背景强度
Fb 是以每一帧的最小值作为背景亮度，Fraw 是 ROI 区域原始亮度FROI 表示减去背景亮度的 ROI 平均亮度曲线 。
（2）消除z方向污染，作为神经元ROI的真实亮度变化
Fcon 是以胞体为中心取一个外围圆环，计算其减背景后的平均亮度曲线Fsig 就是 ROI 区域减去背景、减去 α 倍外环得到的 ROI 平均亮度曲线。
（3）计算亮度变化和自身基线的比值，作为相对荧光强度
△F/F 的计算：计算 Fsig 相对 F0 增长的倍数其中基线 F0 是对 FROI 所有的点按幅值从小到大排序，取百分位点 。
减圆环的意义
由于双光子成像是逐点扫描的特点，在采集任何一个像素亮度时周围的神经元（X、Y方向）并未照射到激光，从而不会发出荧光，因此该点像素的亮度只会受到上下层（Z方向）其他神经元胞体或者树突、轴突荧光带来的污染。减圆环法中，对于每一个胞体，我们都选取了它紧邻的周围背景的一个圆环，作为对它自身上下层Z方向污染的估计值，借此消除Z方向的污染。下图所示的例子中，x=2845处的尖峰在神经元胞体和其周围都能观察到，因此可以推断这个尖峰并非该胞体本身发出，通过减圆环法就可以很好地消除。
参考文献
[1] Liang B, Zhang L, Barbera G, et al. Distinct and dynamic ON and OFF neural ensembles in the prefrontal cortex code social exploration[J]. Neuron, 2018, 100(3): 700-714. e9.
